
2. ERGEBNISSE 81
Auch die mit EGFP X
a
-M13 HeliTag transformierten E. coli Zellen exprimierten aktives
EGFP (EGFP X
a
-M13 HeliTag-Protein). Die Kultivierung dieses Klons und die nach der Lyse
durchgeführte IMAC zeigte, daß die Fusion der X
a
-Erkennungssequenz keinen Einfluß auf die
Funktion des HeliTags M13 hatte.
2.4.1.8 Durchmusterung auf neue Peptidsequenzen zur IMAC (HeliTags)
Kolonien, die im UV-Licht grün fluoreszierten wurden selektiert und in Mikrotiterplatten in
LB-Medium kultiviert. Nach der Herstellung einer Replikaplatte wurden die Zellen aufge-
schlossen und der fluoreszierende Überstand in eine neue Platte überführt, um den Referenz-
wert zu bestimmen.
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
Reinigungsschritt
HeliTag A1
HeliTag A14
HeliTag M13
ohne Tag
Abbildung 2.22: Medium Throughput Screening (MTS) mit Qiagen Ni-NTA Säulen zur
Validierung von HeliTags.
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