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2. ERGEBNISSE 47

2.1.2.3 Durchmusterung verschiedener Klone transformiert mit pGAPZαA_ROL auf ihre

Fähigkeit ROL zu produzieren

Zeocin-resistente, mit dem pGAPZαΑ_ROL Vektor transformierte Klone, wurden auf YPD-

Platten mit Tributyrin transferiert und die Bildung von Halos detektiert. Die Klone, welche

die größten Höfe bildeten wurden selektiert und ebenfalls ca. 72 h in YPD Medium kultiviert.

Die resultierenden Aktivitäten bei gleicher OD

600

waren jedoch mit 20-60 U ml

-1

deutlich

geringer, als bei den Konstrukten mit pPIC Vektoren. Trotzdem wurden einige Kultivierungs-

versuche in Schüttelkolben (500 ml) und Fermentern (5 l) durchgeführt. In diesen konnte je-

weils eine große Zellmasse erreicht werden, die Ausbeute an aktiver Lipase ließ sich jedoch

nicht steigern. Es konnte in keiner Kultivierung mehr als 60 U ml

-1

aktive ROL im Kultur-

überstand erhalten werden. Aus diesem Grunde wurde die Expression von ROL in Pichia

pastoris mit dem konstitutiven pGAP Vektor nicht weiter verfolgt.

1 3 7 12 38 42

Klone

Abbildung 2.4: Relative Lipaseaktivität einzelner Pichia pastoris Klone transformiert

mit pGAPZαA_ROL.

Die Werte wurden wie in Abbildung 2.3 auf ihre OD

600

= 15 bezogen.

1 2 ... 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 ... 152 153

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