
2. ERGEBNISSE 66
94 kDa
67 kDa
43 kDa
30 kDa
20 kDa
14 kDa
S1
2
35
4S
Abbildung 2.16: SDS PAGE der ROL aus Pichia pastoris kultiviert in komplexem
Medium.
S LMW Standard; 1 Überstand (konz.); 2 gereinigte ROL, behandelt mit
Endo H; 3 gereinigte ROL, behandelt mit Endo H unter denaturierenden Be-
dingungen; 4 gereinigte ROL aus E. coli; 5 gereinigte ROL aus P. pastoris
(Die Abbildung wurde aus zwei separaten Gelen zur besseren Anschaulich-
keit fusioniert).
Zur Lagerung wurde die homogene Protein-Lösung gegen Wasser dialysiert und lyophylisiert.
Diese gefriergetrocknete Lipasepräparation wurde nach einer Lagerzeit von einem Jahr bei
-20 °C unter Feuchtigkeitsausschluß erneut analysiert. Dabei konnte kein Verlust an Aktivität
nachgewiesen werden.
2.3.2 Reinigung der in synthetischem Medium kultivierten ROL aus Pichia pastoris,
(Fermentation 6)
Bei Reinigung der in synthetischem Medium kultivierten ROL aus Pichia pastoris wurde die-
selbe Reinigungsstrategie, wie bei der in komplexem Medium verwendet (Kapitel 2.3.1). Der
Überstand wurde diafiltriert, dies führte zu einem Verlust von ca. 20 % an Lipaseaktivität
(vergleichbar zum analogen Schritt bei komplexem Medium in 2.3.1) gefolgt von einem
10 %igen Verlust bei der Dialyse gegen Wasser. Bei diesem Schritt ergab sich
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