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2. ERGEBNISSE 57

des Lufteintrags konnte der zwischenzeitlich auf nahezu 0 % a/jointfilesconvert/483621/bgesunkene Wert für den

gelösten Sauerstoff wieder auf über 20 % erhöht werden. Nach ca. 70 h begann der DO-Wert

bei gleicher Flußrate der Luft erneut abzusinken und zeigte damit vermeintlich eine C-

Quellen Limitierung an. Die Methanol-Analyse ergab jedoch eine Stagnation des Methanol-

Gehaltes auf 10 g l

-1

, bzw. sogar eine Steigerung auf fast 15 g l

-1

Bei Fermentation 4 konnte weiterhin gezeigt werden, daß die Hefezellen bei einer Konzentra-

tion über 1 % (v/v) Methanol nicht absterben, sondern nur keine Expression mehr zu be-

obachten ist. Vielmehr scheinen die Zellen in einer Art paralysiertem Zustand zu sein. Die

Expression setzte zu dem Zeitpunkt wieder ein, an dem der Methanolgehalt, vermutlich

hauptsächlich durch den Austrag durch Verdunstung, nach 90 h moderate Werte erreichte.

Durch die starke Expression in den letzten 30 h konnte trotzdem eine Lipaseaktivität von 130

U ml

-1

erreicht werden. Dies entspricht einer Produktivität von 4800 U l

-1

2.2.4 Bestimmung des Methanol-Gehalts des Fermentationsüberstands

Zur Validierung der GC-Methode für die Gehaltsbestimmung von Methanol in Fermenter-

überständen wurden Methanol-Basalsalz Medium Mischungen gaschromatographisch unter-

sucht.

Abbildung 2.10 zeigt, daß zwischen dem GC-Signal und dem Methanolgehalt im Medium,

ein linearer Zusammenhang besteht. Vergleichbare Untersuchungen mit BMMY-Medium

ergaben, daß die Methode ebenso bei der Methanol-Analyse von Kultivierungen in kom-

plexem Medium angewendet werden kann (nicht gezeigt). Bei der Untersuchung von Lösun-

gen mit einem Methanolanteil von mehr als 5 g l

-1

wurden diese entsprechend verdünnnt.

Durch die Zumischung von Ethanol und Glycerin konnte gezeigt werden, daß Methanol und

Ethanol mit dieser Methode parallel analysiert werden können. Glycerin stört zwar die

Analyse der beiden anderen Alkohole nicht, quantifizierbare Aussagen waren jedoch nicht

möglich, da die Signalstärke nicht mit dem tatsächlichen Glyceringehalt korrellierbar war

(nicht gezeigt).

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