Bosch PPS8 C2 Series Uživatelský manuál Strana 36

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1. EINLEITUNG 35
1.3.2.1 IMAC
Die Metallaffinitätschromatography (engl.: Immobilized Metal Affinity Chromatography;
IMAC) ist eine effektive Methode, um ein Protein oder Peptidfragment in wenigen Schritten,
manchmal nur einem, aufzureinigen.
NH
COOH
COO
-
Na
+
COO
-
Na
+
NH
COOH
COO
-
COO
-
Ni
2+
NH
N
NH
NH
O
O
NH
N
NH
Ni
2+
NH
COOH
COO
-
COO
-
N
NH
N
NH
NH
COOH
COO
-
Na
+
COO
-
Na
+
NH
COOH
COO
-
COO
-
Ni
2+
Beladen der Chelat-Sepharose mit
Ni
2+
-Ionen
Bindung des mit einem Tag
versehenen Proteins an die
immobilisierten Ni
2+
-Ionen.
Verdrängung des gebundenen
Proteins durch einen Überschuß
Imidazol.
Regeneration der Chelat-Sepharose
durch EDTA
Abbildung 1.11: Schematischer Ablauf einer IMAC Reinigung mit "Chelating
Sepharose" von Pharmacia.
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