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1. EINLEITUNG 34

1.3 Proteinreinigung

1.3.1 Konventionelle Proteinreinigungsmethoden

Die Proteinreinigung ist heute ein weit gefächertes Gebiet. Die Grundlagen sind in verschie-

denen Lehrbüchern erklärt und zusammengefaßt und können in diesem Rahmen nicht disku-

tiert werden. In dieser Arbeit wurden verschiedene Proteinaufreinigungsmethoden verwendet,

insbesondere chromatographische Techniken wie Ionenaustauschchromatographie oder Tren-

nung auf Grund hydrophober Wechselwirkungen. Allen Techniken gemein ist, daß sie allge-

meine Proteineigenschaften zur Trennung der Proteine verwenden. Häufig sind dann aber

verschiedene Reinigungsschritte nötig, da verschiedene Proteine in einzelnen Eigenschaften,

z. B. ihrer Hydrophobizität, ein gleiches Verhalten zeigen können. Aus diesem Grund wurde

die Affinitätschromatographie entwickelt (siehe 1.3.2). In dieser wird eine spezifische Eigen-

schaft eines Proteins ausgenützt, z. B. die Bindung eines Antikörpers an ein Hapten oder ein

Antigen. Auf diese spezielle Art der Chromatographie soll etwas genauer eingegangen

werden.

1.3.2 Affinitätschromatographie

Die Affinitätschromatographie entstand in den Jahren zwischen 1960 und 1970 (Scopes

1993). Ursprünglich basierte sie auf der Immobilisierung des Substrates eines Enzyms an das

dieses durch spezifische Wechselwirkungen band. Seither sind eine ganze Reihe ver-

schiedener Aufreinigungsmethoden entwickelt worden, z. B. durch den Einsatz von Anti-

körpern. Allen gemein war ursprünglich, daß sie eine biospezifische Wechselwirkung zur

Bindung nutzen.

Der Begriff Affinitätschromatographie hat sich aber auch auf eine ganze Reihe anderer

chromatographischer Methoden wie z. B. die Metallaffinitätschromatographie ausgedehnt, die

nicht oder nur wenig auf biospezifischen Wirkungen basiert. Heute repräsentiert dieser

Begriff alle Arten von spezifischen Wechselwirkungen bei der Chromatographie.

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